Efeitos da Ozonioterapia doméstica em modelo experimental Murino de vulvovaginite por Candida albicans
Data
2022
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Editor
Universidade Brasil
Resumo
Na candidíase vulvovaginal, observa-se comumente prurido, placas esbranquiçadas, leucorreia, eritema e edema na vulva e vagina. Para o tratamento comum da candidíase utiliza-se antifúngicos em forma de comprimidos ou pomadas aplicadas diretamente na área da infecção. Antimicóticos apresentam alto custo e podem gerar efeitos colaterais indesejáveis. Uma proposta de baixo custo, simples, de fácil acesso e com poucos efeitos colaterais para o tratamento, pode ser embasada no uso do ozônio de forma medicinal. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da ozonioterapia medicinal em C. albicans por meio de ensaios in vitro e in vivo através do modelo experimental murino de vulvovaginite. O experimento foi conduzido in vitro pelo cultivo de cepas de Candida albicans por 24 h a 37 °C. Nas placas utilizadas para controle, foram semeados 10 µL da suspensão celular de C. albicans, com alça calibrada, em placas de Petri de 10 mm, contendo meio sólido Ágar Sabourand Dextrose. Essas placas não foram submetidas à exposição de ozônio. No experimento in vivo utilizou-se camundongos C57/BL6, fêmeas, com 45 dias de vida. diluídos em 0.2 ml de água destilada na dose de 2mg/kg/dia durante 7 dias. Após a supressão da atividade ovariana, foi inoculada, em dose única e sob anestesia, 20 µL de suspensão de Candida albicans em PBS estéril, na concentração de 105UFC/ml células leveduriforme. A distribuição se dera em 4 grupos de animais: Grupo Controle Absoluto: Não submetidos à infecção pelo patógeno; Grupo Controle: Submetidos à infecção por C. albicans, porém não tratados; Grupo Ozonioterapia: Submetidos à infecção agente patológico e tratados com ozonioterapia de uso medicinal; Grupo Lavagem: Submetidos à infecção e posteriormente tratados através de lavagem vaginal. Sinalizado um grupo controle. Para o Grupo Ozonioterapia foi realizado o procedimento de lavagem vulvovaginal uma vez ao dia durante três dias. Prontamente antes do sacrifício dos roedores, fora realizado o procedimento de coleta do lavado vaginal. Instilou-se 50 µL de PBS estéril na vagina de cada animal, com o uso de um micropipetador e ponteira de 100 µL, aspirando-se imediatamente em seguida. Os dados obtidos das UFC foram analisados através de estatística descritiva e analítica através do teste ANOVA, utilizando o teste de Tukey como post hoc, com alfa fixado em p>0,05. Verificou-se que a placa controle apresentou maior quantidade de UFC quando comparada às placas expostas ao ozônio pelo ar. Quanto a quantidade de UFC, a exposição por 600s demonstrou capaz de reduzir 98,89% o número de UFC quando comparado com as placas controle. As suspensões ozonizadas durante 60s e 150s não demonstraram crescimento celular, obtendo-se uma diferença de 100% quando comparada com a placa controle. Conclui-se com o estudo que o gás ozônio apresentou grande eficácia sobre a proliferação de C. albicans in vitro. Os melhores resultados observados foram com aplicação em meio líquido. A ozonioterapia foi capaz de reduzir significativamente a infecção no modelo experimental utilizado. Nos experimentos conduzidos in vivo, o número de UFC/ml encontrado foi menor no grupo tratado com ozônio.
Abstract
In vulvovaginal candidiasis, itching, whitish plaques, leucorrhoea, erythema and edema in the vulva and vagina are commonly observed or observed. For common treatment of candidiasis, antifungals are used in the form of pills or ointments applied directly to the area. Antimycotics can have undesirable side effects and are expensive. A proposal of low cost, simple, easy to access and with few side effects for the treatment can be based on the medicinal use of ozone. The aim of the study was to evaluate the effects of medicinal domestic ozone therapy on C. albicans through in vitro and in vivo assays using the murine experimental model of vulvovaginitis. The experiment was conducted in vitro by cultivating Candida albicans strains for 24 h at 37 °C in solid medium Agar Sabouraud Dextrose. In the plates used for control, 10 µL of the cell suspension of C. albicans were seeded, with a calibrated loop, in 10 mm Petri dishes, containing solid medium Agar Sabourand Dextrose (Oxoid). These plates have not been subjected to ozone exposure. The in vivo experiment used 45-day-old female C57/BL6 mice. Diluted in 0.2 ml of distilled water at a dose of 2mg/kg/day for 7 days. After suppression of ovarian activity, 20 µL of Candida albicans suspension in sterile PBS, at a concentration of 105 yeast cells, was inoculated in a single dose and under anesthesia. The distribution took place in 4 groups of animals: Absolute Control Group: Not submitted to infection by the pathogen. Control Group: Subjected to C. albicans infection, but not treated. Ozone Therapy Group: Subjected to pathological agent infection and treated with medicinal ozone therapy. Wash Group: Submitted to infection and later treated with vaginal washing. Flagged as control group. For the Ozone Therapy Group, the vulvovaginal lavage procedure was performed once a day for three days. Promptly before the sacrifice of the rodents, the procedure for collecting the vaginal lavage was performed. 50 µL of sterile PBS was instilled into the vagina of each animal, using a micropipettor and 100 µL tip, and aspirated immediately afterwards. The data obtained from the CFU were analyzed using descriptive and analytical statistics using the ANOVA test, using the Tukey test as posts hoc, with alpha set at p>0.05. It was found that the control plate had a higher amount of CFU when compared to plates exposed to ozone in the air. Exposure for 600 s was able to reduce 98.89% the number of CFU when compared to control plates. The suspensions ozonized for 60 s and 150 s did not show cell growth, obtaining a difference of 100% when compared to the control plate. The amount of UFC counted in ozonized suspensions. The ozone gas showed great efficacy on the proliferation of C. albicans in vitro. Best results observed were with application in liquid medium. Ozone therapy was able to significantly reduce the infection in the experimental model used. In experiments conducted in vivo, the number of CFU/ml found was lower in the group treated with ozone.
Descrição
Palavras-chave
Candida Albicans, Ozônio, Candidíase vaginal, Murinos