Efeitos da Ozonioterapia doméstica em modelo experimental Murino de vulvovaginite por Candida albicans
Data
2022
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Editor
Universidade Brasil
Resumo
Na candidíase vulvovaginal, observa-se comumente prurido, placas esbranquiçadas,  leucorreia, eritema e edema na vulva e vagina. Para o tratamento comum da  candidíase utiliza-se antifúngicos em forma de comprimidos ou pomadas aplicadas  diretamente na área da infecção. Antimicóticos apresentam alto custo e podem gerar  efeitos colaterais indesejáveis. Uma proposta de baixo custo, simples, de fácil acesso  e com poucos efeitos colaterais para o tratamento, pode ser embasada no uso do  ozônio de forma medicinal. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da  ozonioterapia medicinal em C. albicans por meio de ensaios in vitro e in vivo através  do modelo experimental murino de vulvovaginite. O experimento foi conduzido in vitro  pelo cultivo de cepas de Candida albicans por 24 h a 37 °C. Nas placas utilizadas para  controle, foram semeados 10 µL da suspensão celular de C. albicans, com alça  calibrada, em placas de Petri de 10 mm, contendo meio sólido Ágar Sabourand  Dextrose. Essas placas não foram submetidas à exposição de ozônio. No experimento  in vivo utilizou-se camundongos C57/BL6, fêmeas, com 45 dias de vida. diluídos em  0.2 ml de água destilada na dose de 2mg/kg/dia durante 7 dias. Após a supressão da  atividade ovariana, foi inoculada, em dose única e sob anestesia, 20 µL de suspensão  de Candida albicans em PBS estéril, na concentração de 105UFC/ml células  leveduriforme. A distribuição se dera em 4 grupos de animais: Grupo Controle  Absoluto: Não submetidos à infecção pelo patógeno; Grupo Controle: Submetidos  à infecção por C. albicans, porém não tratados; Grupo Ozonioterapia: Submetidos à  infecção agente patológico e tratados com ozonioterapia de uso medicinal; Grupo  Lavagem: Submetidos à infecção e posteriormente tratados através de lavagem  vaginal. Sinalizado um grupo controle. Para o Grupo Ozonioterapia foi realizado o  procedimento de lavagem vulvovaginal uma vez ao dia durante três dias. Prontamente  antes do sacrifício dos roedores, fora realizado o procedimento de coleta do lavado  vaginal. Instilou-se 50 µL de PBS estéril na vagina de cada animal, com o uso de um  micropipetador e ponteira de 100 µL, aspirando-se imediatamente em seguida. Os  dados obtidos das UFC foram analisados através de estatística descritiva e analítica  através do teste ANOVA, utilizando o teste de Tukey como post hoc, com alfa fixado  em p>0,05. Verificou-se que a placa controle apresentou maior quantidade de UFC  quando comparada às placas expostas ao ozônio pelo ar.  Quanto a quantidade de UFC, a exposição por 600s demonstrou capaz de reduzir  98,89% o número de UFC quando comparado com as placas controle. As suspensões  ozonizadas durante 60s e 150s não demonstraram crescimento celular, obtendo-se  uma diferença de 100% quando comparada com a placa controle. Conclui-se com o  estudo que o gás ozônio apresentou grande eficácia sobre a proliferação de C.  albicans in vitro. Os melhores resultados observados foram com aplicação em meio  líquido. A ozonioterapia foi capaz de reduzir significativamente a infecção no modelo  experimental utilizado. Nos experimentos conduzidos in vivo, o número de UFC/ml  encontrado foi menor no grupo tratado com ozônio.
Abstract
In vulvovaginal candidiasis, itching, whitish plaques, leucorrhoea, erythema and  edema in the vulva and vagina are commonly observed or observed. For common  treatment of candidiasis, antifungals are used in the form of pills or ointments applied  directly to the area. Antimycotics can have undesirable side effects and are expensive.  A proposal of low cost, simple, easy to access and with few side effects for the  treatment can be based on the medicinal use of ozone. The aim of the study was to  evaluate the effects of medicinal domestic ozone therapy on C. albicans through in  vitro and in vivo assays using the murine experimental model of vulvovaginitis. The  experiment was conducted in vitro by cultivating Candida albicans strains for 24 h at  37 °C in solid medium Agar Sabouraud Dextrose. In the plates used for control, 10 µL  of the cell suspension of C. albicans were seeded, with a calibrated loop, in 10 mm  Petri dishes, containing solid medium Agar Sabourand Dextrose (Oxoid). These plates  have not been subjected to ozone exposure. The in vivo experiment used 45-day-old  female C57/BL6 mice. Diluted in 0.2 ml of distilled water at a dose of 2mg/kg/day for 7  days. After suppression of ovarian activity, 20 µL of Candida albicans suspension in  sterile PBS, at a concentration of 105 yeast cells, was inoculated in a single dose and  under anesthesia. The distribution took place in 4 groups of animals: Absolute Control  Group: Not submitted to infection by the pathogen. Control Group: Subjected to C.  albicans infection, but not treated. Ozone Therapy Group: Subjected to pathological  agent infection and treated with medicinal ozone therapy. Wash Group: Submitted to  infection and later treated with vaginal washing. Flagged as control group. For the  Ozone Therapy Group, the vulvovaginal lavage procedure was performed once a day  for three days. Promptly before the sacrifice of the rodents, the procedure for collecting  the vaginal lavage was performed. 50 µL of sterile PBS was instilled into the vagina of  each animal, using a micropipettor and 100 µL tip, and aspirated immediately  afterwards. The data obtained from the CFU were analyzed using descriptive and  analytical statistics using the ANOVA test, using the Tukey test as posts hoc, with alpha  set at p>0.05. It was found that the control plate had a higher amount of CFU when  compared to plates exposed to ozone in the air. Exposure for 600 s was able to reduce  98.89% the number of CFU when compared to control plates. The suspensions ozonized for 60 s and 150 s did not show cell growth, obtaining a  difference of 100% when compared to the control plate. The amount of UFC counted  in ozonized suspensions. The ozone gas showed great efficacy on the proliferation of  C. albicans in vitro. Best results observed were with application in liquid medium.  Ozone therapy was able to significantly reduce the infection in the experimental model  used. In experiments conducted in vivo, the number of CFU/ml found was lower in the  group treated with ozone.
Descrição
Palavras-chave
Candida Albicans, Ozônio, Candidíase vaginal, Murinos
