Nanocompósitos à base de hidroxiapatita e nanotubos de carbono como reforço em biopolimero heterólogo de fibrina derivado do veneno de serpente para regeneração óssea
Data
2021
Autores
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Editor
Universidade Brasil
Resumo
O biopolímero de fibrina (BHF) desenvolvido a partir do veneno de Crotalus durissus
terrificus (cascavel) é um derivado heterólogo semelhante à trombina que converte
fibrinogênio em fibrina. É um produto natural, em forma de gel, biodegradável,
bioabsorvente, não tóxico e não imunogênico. Por outro lado, nanocompósitos de
hidroxiapatita (nHAp) e nanotubos de carbono (NTCs) apresentam bioatividade, não
são citotóxicos e possuem efeito bactericida. O objetivo do presente trabalho foi avaliar
a mistura de nHAp e NTCs com o BHF no processo de aceleração do reparo ósseo.
A produção dos nanocompósitos consistiu, primeiramente, na síntese dos NTCs de
múltiplas paredes, seguido de sua funcionalização ao plasma de O2 e purificação com
banho ácido. Com esse material pronto, produziu-se o compósito de nHAp com NTC.
Em seguida esse material foi adicionado no BHF derivado do veneno da serpente
Crotalus durissus terríficus (cascavel) e realizada a caracterização físico-química
desta mistura. As pastilhas formadas por essas misturas foram analisadas e
fotografadas em microscopia eletrônica de varredura (MEV). Foram também testados
em cultura de células osteoblásticas para verificar a sua citotoxicidade. Para tal,
células da linhagem MC3T3-E1 foram cultivadas e verificados a viabilidade celular
utilizando as técnicas de AlamarBlue® e LIVE/DEAD® Viability/Cytotoxicity. Foi
realizada também experimentos em ratos induzindo o defeito ósseo em tíbias e
verificando a reparação óssea utilizando técnicas de histologia. Todos os dados foram
analisados por meio do teste de normalidade, sendo os resultados paramétricos
submetidos ao teste de variância two way ANOVA (tempo xs amostras)
complementado pelo pós-teste de Tukey a fim de verificar as diferenças estatísticas
entre grupos. Foi utilizado o software GraphPad Prism 5.01 (San Diego, CA, USA). Os
resultados foram apresentados como média desvio ± padrão (p≤0,05). Os resultados
mostraram que houve uma boa distribuição homogênea das misturas, não houve
mudança no pH e massa das amostras e que a mistura mais adequada para os testes
in vitro é a de BHF+nHAp com nanotubos de carbono 1 e 2%. A mistura não é
citotóxica para células da linhagem MC3T3-E1. O BHF assim como sua associação
com nHAp e NTCs promoveram o tecido ósseo neoformado na área da fratura,
mostrando potencial osteogênico em fraturas ósseas.
Abstract
Fibrin sealants (BHF), developed from human hematological derivatives, mimic
physiological clots, being widely used in general, cosmetic and postoperative surgeries
due to their hemostatic and adhesive action. BHF developed from the venom of
Crotalus durissus terrificus (rattlesnake) is a heterologous thrombin-like derivative that
converts fibrinogen into fibrin. As it is a natural product, in gel form, biodegradable,
bioabsorbent, non-toxic and non-immunogenic. On the other hand, hydroxyapatite
nanocomposites (nHAp) and carbon nanotubes (NTCs), produced by chemical
synthesis assisted by the ultrasound technique, present bioactivity, are not cytotoxic
and have a bactericidal effect. The aim of the present work is to evaluate the mixture
of hydroxyapatite-based nanocomposites and carbon nanotubes with fibrin sealant as
agents in the process of accelerating bone regeneration. The production of the
nanocomposites consisted, firstly, in the synthesis of NTCs with multiple walls,
followed by their functionalization to the O2 plasma and purification with an acid bath.
With this material ready, the composite of nHAp with NTC was produced. Then, this
material was added to the BHF and the physicochemical characterization of this
mixture was carried out. The pellets formed by these mixtures were analyzed and
photographed under scanning electron microscopy (SEM). These mixtures were also
tested in MC3T3-E1 cell cultures to verify their toxicity. For this purpose, osteoblast
cells were cultured and cell viability was verified using the alamarBlue® e LIVE/DEAD®
Viability/Cytotoxicity technique. Experiments were also carried out in rats, inducing
bone defect in tibias and verifying bone repair. All data were analyzed using the
normality test, and the parametric results were submitted to the two-way ANOVA
complemented by Tukey's post-test (p≤0,05). The results showed that there was a
good homogeneous distribution of the mixtures and that the most suitable mixture for
in vitro tests is that of BFH+nHAp and 1% and 2% carbon nanotubes. The mixture is
not cytotoxic and promoted neoformation in the fracture area, demonstrating
osteogenic potential in bone fractures.
Descrição
Palavras-chave
Crotalus dirissus terrificus, Biopolímero de fibrina, Nanocompósitos hidroxiapatita, Nanotubulos de carbono, Reparo ósseo